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miRNA定量PCR

介:microRNA (miRNA) 是一類長度約22 nt的非編碼單鏈RNA,廣泛存在于動物、植物中,具有基因表達調控的功能,與生物體的生長、發(fā)育、癌癥的發(fā)生等現象息息相關。

目前通用的miRNA逆轉錄和定量PCR方法(Stem-Loop莖環(huán)法),原理如下:

 

技術優(yōu)勢

(1)       采用miRNA專用提取試劑盒(進口產品)有效從植物、動物中提取miRNA,然后采用莖環(huán)法進行逆轉錄,Taqman探針法進行定量PCR分析,從而提高miRNA檢測特異性和靈敏度。

(2)       本公司擁有miRNA定量檢測的多種內參,如:U6,SNORD48,SNORD44等多種Human RatMouse內參,有效的提高了miRNA定量PCR精確性。

客戶須知:

miRNA定量PCR

周期

最終提供客戶資料

miRNA定量PCR

10-14個工作日(視樣品和基因數目而定

詳細實驗總結報告(包括RT引物、擴增引物序列、microRNA提取、逆轉錄實驗、擴增曲線、標準曲線、樣品重復結果、相對表達分析結果,統(tǒng)計分析等)

案例:

1.       對于miRNA家族成員設計不同的莖環(huán)逆轉錄引物,從而提高miRNA檢測的特異性。

下面這個實驗從hsa-let家族進行設計不同的逆轉錄引物,而且對定量PCR正向引物進行優(yōu)化,從而有效區(qū)分hsa-let檢測的特異性,如下圖所示:

2.       血清中miRNA表達分析,從中找到與疾病有關的miRNA分子標志物,以及miRNA轉移情況。

血清中miRNA定量一直是目前研究的熱點之一,由于血清中雜蛋白較多,miRNA含量較低,眾多科研人員或公司很難做好血清miRNA定量分析。下面該實驗從正常以及某患者血清中,分離miRNA,從中對hsa-200C-3P、hsa-200C-3P以及hsa-145-5P表達水平進行分析,從而分析miRNA表達與腫瘤發(fā)生發(fā)展的關系。本實驗中引入了外參cel-miR-39,準確標準化了血清miRNA提取準確性以及定量數據分析的精確性。

客戶提供:

樣品類型

組織樣本

細胞樣品

樣品需要量

200 mg

 

5-10×106(相當于六孔板長滿后的一個孔細胞量)

取樣和保存環(huán)境

新鮮;-80℃凍存或存于組織保存液中;物種及基因名稱(最好提供NCBI中的基因序列號)

物種及miRNA名稱(最好提供miRNA database序列號,其參考網址:http://www.microrna.org/

新鮮;-80℃凍存或存于組織保存液中);物種及基因名稱(最好提供NCBI中的基因序列號)

物種及miRNA名稱(最好提供miRNA database序列號,其參考網址:http://www.microrna.org/

運輸

杭州市內干冰上門取樣;

外地客戶干冰快遞運輸;

組織保存液,冰袋運輸

杭州市內干冰上門取樣;

外地客戶干冰快遞運輸;

 

*(經本公司評估后,實驗沒有結果,不收取任何費用)

 

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